U87MG是膠質母細胞瘤研究中廣泛使用的人腦膠質瘤細胞系，在腫瘤生物學、藥物篩選和放射生物學等領域具有較高的應用頻率。其體外培養的標準化操作是保證實驗數據可重復性和細胞生物學功能完整性的基礎。以下從細胞培養管理角度，系統闡述人腦膠質瘤細胞系U87MG在復蘇、傳代、凍存及質量控制各階段的操作要點。

細胞復蘇的操作流程

U87MG細胞從液氮中取出后，應迅速轉移至37℃水浴中，輕輕搖晃使凍存管內的細胞懸液在短時間內解凍。解凍后的細胞懸液應逐滴加入預熱的培養基中，以降低DMSO對細胞的滲透性損傷。離心后棄去上清，用新鮮培養基重懸細胞，接種于培養瓶中，置于37℃、5% CO?培養箱中培養。復蘇后24小時內應避免頻繁觀察或移動培養瓶，以利于細胞貼壁和狀態恢復。

傳代培養的規范操作

U87MG細胞貼壁生長，傳代操作應在細胞達到80%-90%匯合度時進行。操作步驟如下：

• 清洗：棄去舊培養基，用無菌磷酸鹽緩沖液（PBS）或Hank's平衡鹽溶液（HBSS）洗滌細胞層，以去除殘留血清對胰蛋白酶的抑制作用。

• 消化：加入適量胰蛋白酶-EDTA溶液，均勻覆蓋細胞層，置于培養箱中消化。需在顯微鏡下觀察細胞形態變化，當多數細胞變圓并開始脫離培養皿表面時，立即加入含血清培養基終止消化，避免過度消化損傷細胞膜蛋白。

• 傳代比例：U87MG的傳代比例通常為1:3至1:6。接種后輕輕搖晃培養瓶，使細胞均勻分布，避免局部過密或過疏影響增殖狀態。傳代后應記錄代次編號，并在培養瓶標簽上注明細胞名稱、代次、日期和操作人。

凍存操作的規范流程

U87MG細胞的凍存應選擇處于對數生長期、形態良好的細胞進行保藏：

• 制備細胞懸液：消化細胞后，用含血清培養基中和胰蛋白酶并離心收集。棄去上清后，用預冷的凍存液（含DMSO和血清的培養基）重懸細胞，分裝至凍存管中。

• 程序降溫：將凍存管放入程序降溫盒中，置于-80℃冰箱，以每分鐘降溫約1℃的速率使細胞逐步適應低溫環境。次日轉移至液氮長期保存。

• 記錄管理：每支凍存管應標注細胞名稱、代次、凍存日期和操作人，并錄入細胞資源庫管理系統。

質量控制與常見問題排查

U87MG的STR基因型分型應定期進行，以確認細胞身份未發生混淆或交叉污染。若細胞出現生長緩慢、形態改變或懸浮細胞增多，應首先排查支原體污染。傳代過程中若出現細胞消化困難，可能提示胰蛋白酶活性下降，應及時更換消化液。